细胞转染效率低！

具有细胞毒性！

实验条件摸索难，重复性不佳！

如果您使用的是化学法细胞转染，一定不要错过本次分享。

 

细胞转染 是指将外源基因如 DNA，RNA 等导入细胞内的技术。随着分子生物学的发展，转染已经成为研究和控制细胞基因功能、实现基因调控的常规工具。市场上各种转染试剂琳琅满目，各有千秋，然而没有任何一种转染试剂可以能够适用于所有细胞种类、满足所有实验需求和目的，成分控认为转染试剂的成分及作用机理对转染效果及细胞生理作用影响显著，是转染试剂选择的重要依据，选试剂时要留意成分哦。
 

严格来讲，转染的方法可以基于化学法、物理法（电穿孔、显微注射等）以及病毒介导法，没有一种方法是放之四海而皆准。作为成分控的小编，本次主要为大家介绍基于各类转染试剂的化学法转染。

 

• 基于磷酸钙成分的转染试剂，其主要作用原理是与 DNA 通过沉淀反应形成磷酸钙-DNA 复合物，粘附到细胞膜表面，借助内吞作用进入细胞质。pH 值，钙离子浓度，DNA 浓度，沉淀时间，细胞孵育时间乃至各组分加入顺序都可能对结果产生影响，因此实验条件摸索和优化时间较长，且重复性不佳。
 

• 基于脂质体的转染试剂包括中性脂质体和阳离子脂质体两种。中性脂质体是利用脂质膜包裹 DNA，借助脂质膜将 DNA 导入细胞膜内。目前应用比较广泛的是带正电的阳离子脂质体转染试剂，DNA 并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电 的 DNA 自动结合到带正电的脂质体上，形成 DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。此方法操作简单，重复性好，在体外转染中有很高的效率，但具有一定的细胞毒性，可能会干扰细胞的代谢。且活性受血清影响，需要去除血清。
 

• 基于阳离子聚合物的转染试剂，带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过内吞作用进入细胞。其又分为树枝状阳离子聚合物和线性阳离子聚合物两类，前者细胞毒性相对较大，后者细胞毒性较小，但其转染效率都高于脂质体转染，适用也较为广范。

 

• 以上单一成分的转染试剂或聚焦于提高效率或着重于降低细胞毒性，可谓鱼和熊掌不可兼得也。

新一代转染试剂，不局限于单一成分，混合了不同专利配方的脂类（非脂质体）、加上蛋白质组分、以及各种的专利成分，兼具了转染效率高和细胞毒性小的优势，且操作更加简单，易于高通量

 

罗氏 X-TremeGENE 便是新一代转染试剂的佼佼者，升级版的多组分混合试剂，兼具极高转染效率和极低细胞毒性，在超过 350 株真核细胞株中获得了高效转染的验证，尤其针对难转染细胞株亦有出色表现。
 

图 1. 两种试剂对 CHO-K1 细胞转染带 GFP 标记的质粒，A 和 C 是转染后荧光显微图，B 和 D 是明场显微图. 与竞争产品比较，X-tremeGENE HP 表现出更优的转染效率更低的细胞毒性

 

图 2. 不同试剂在含血清的培养基中对四种很难转染的细胞株进行转染，X-tremeGENE HP 试剂远优于其他试剂

 

 

超过 350 种细胞株的高效转染验证（点击以下图片即可选购）

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默克自 2015 年成为罗氏生化试剂的全球独家代理，并于 2017 年扩大代理协议，增加对 KAPA PCR/qPCR 产品及罗氏自有核酸提取、qPCR 产品的代理。至今，Merck 代理的 Roche 产品可以提供从细胞培养和功能分析、基因机理研究到蛋白机理研究的完整方案：

 

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