默克生命科学高分推荐便宜好用的生物功能性外泌体制备方案，赶紧收藏！

外泌小体（Exosome）是一种囊泡结构，直径通常在 30-150nm，常见于正常体液和病理样本，培养细胞也可分泌。研究人员已经在血液、唾液、尿液、母乳等中发现外泌小体，其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流，影响和调控着多方面的生理功能，包括肿瘤发生、免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现，外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利，成为体外诊断、biomarker 研究的新热点。
 

分泌和膜出芽生成囊泡

免疫调控

神经元-神经胶质通讯

肿瘤演进

近年来随着分离纯化技术的提高，关于外泌小体的研究成果颇丰；这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近 20 年的探索，已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。

1、经典超速离心法制备外泌体

超速离心法是制备外泌体的金标方法，但是有所局限：

● 设备非常昂贵

●  对经验要求较高

●  操作时间长，有一定的安全风险
 

100,000×g 离心，操作时长超过 5 个半小时

在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求，以及起始样品的规模、数量，可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒，对操作人员也没有特别的经验要求，超滤法后来居上，成为实验室中制备外泌体的通用方法。

2、过滤+超滤

简单两步，快捷制备外泌体

根据起始样品量选择合适规格的过滤和超滤工具

制备的外泌体用于细胞学或动物实验前需要做无菌处理

Ultrafree 离心式微滤管

TIPS

●  无血清样品选择 3KD 孔径为了尽可能提高外泌体的回收率。 

●  有血清样品选择 100KD/500KD 孔径为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中的白蛋白影响。 

●  样品体积大于 30 mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon 70，注意超滤杯在 200 mL 以内时吸附损耗可能较超滤管有所增加。

不同方法制备外泌小体产量比较

默克生命科学超滤法制备的外泌小体电镜照片（放大倍数 87000×)。小体直径 16 - 82nm，有些达到 485nm。

进一步精制……

经过简便的「微滤澄清+超滤富集」两步法，制备的外泌体可直接用于下游各种分析，如果需要纯度更高的外泌体，可以采用抗体包被的琼脂糖珠或磁珠进一步纯化。

抗体包被磁珠亲和纯化
 

默克生命科学已经建立了基于「微滤+超滤」的外泌体制备操作标准，相较于需要昂贵的设备及繁琐操作的超速密度梯度离心，用实验室常见的工具解决外泌体制备的高大上问题，真是惠而不费，不亦乐乎？