这个年过的有点崎岖，在面对社会性问题时疫情给我们带来了很多正能量，相信很多还没返校的人已经给自己立了 flag。在我们回望过去的一年，这个时代已经变了。任何的进步都被透明公开的呈现在我们面前，而我们看到的好消息远比自己收获的多，所以我们总忍不住问自己，「我成长了吗？」「我的实验能顺利些吗？」 「我的科研之路还要继续吗？」

躺着想问题远比站着干大事来的容易，而成功的人总是在干大事的时候不断解决问题并总结问题。在科研的道路上，有如火箭式上升连发 3 篇 Science 的的 90 后 CRISPR 女神杨璐菡，有如深耕播种的共和国勋章得主袁隆平院士、屠呦呦等人，在感慨别人的成就时，我们却不曾深究过其背后的秘诀或精神。

世说「好事多磨」，小编看来并非经历多少磨难、重做多少实验才能成就好事、好实验，而是在成功的道路上多磨砺自己的思维并可控地执行在实践中。在师兄师姐们告诉你一堆他们摸索出来的道理时，你是全盘接收还是思辨下哪里不对？「这样做就对了！」就真的对了吗？「差不多就行了！」还能再粗糙点吗？！

 

所以今天「膜法学院」开讲的第一课是：WB 实验的转印膜，你用对了吗？还在一「膜」到底吗？

选膜是个大学问，而你将这个选择权交谁了呢？「我们实验室一直用这个，用的挺好的。」待我们看看科技革新的成果再判断你是否有更好的选择。

首先，WB 常用的转印膜一般是两种，依据材质分为 PVDF 膜（最常用）和 NC 膜，简要概括两者区别如下：

表 1. PVDF 膜和 NC 膜的特性和应用对比

其次，WB 转印非常考验实验者对研究的蛋白及其所属环境是否足够了解。丰度/表达量如何？是否需要去除高丰度杂蛋白？分子量区间多大？转印效率如何？蛋白流失了吗？

图 1. -P 膜（左）和-PSQ 膜（右）后面衬垫-PSQ 膜，可以看到部分高丰度蛋白穿过-P 膜渗漏到衬垫的膜上。

由此可见，膜孔径越小，小分子蛋白（<20kDa）渗漏/流失越少，蛋白载量越高，更适合低丰度蛋白检测。

其三，WB 实验依据需要显色的形式分为化学发光和荧光两者，荧光 WB 对膜的背景要求更高，虽然可以依赖成像仪或者后期软件进行微调，但对于低丰度蛋白、多重荧光检测或者想发高分文章，还是需要原图示人。选择低荧光背景、高蛋白载量的膜，如下 FL 系列即为荧光 WB 最佳转印膜选择。

图 2. 几种膜在荧光 WB 成像中的表现，FL 膜具有最好的背景。

再者，考虑到安全因素、节约时间和经费，亦可选择安全型转印膜 Immobilon-E 系列，省去甲醇预激活步骤。

综上，WB 转印膜依据蛋白类型、分子量和成像形式有多种优质选择。

表 2. Immobilon®转印膜全系列产品选择指南

所以在你可以有选择的时候千万别凑合，每个细节都会决定我们将来的高度。

点此，您还可以了解更多有关 Western Blot 的干货哦 ～