蛋白纯化一步就搞定的黑科技，你为什么还没用？

耗时长，产量低，大家其实都一样

蛋白从克隆表达到纯化脱盐浓缩，一路经过千山万水，宝贵的活性蛋白产量是很多人的「命根子」。然鹅，努力的我们还是苦恼的时候多，欣喜的时候太少太少～～

纯化黑科技，是时候放大招了

有没有什么好方法能让操作步骤少一点、再少一点，而同时蛋白的活性及产量损失也少一点、再少一点？？

让我们看看那些蛋白操作高手的秘密武器吧——Amicon® Pro

由传统方法升级到革命性的 Amicon® Pro 纯化超滤系统，纯化、浓缩、换液从此不同。

真的能这样操作？？

视频：https://v.qq.com/x/page/q0378jlg84p.html

让我们一起来欣赏一下 Amicon® Pro 带来的蛋白纯化浓缩的流畅操作。

操作 1

亲和纯化——多样本操作，更快更好

6 次低速离心，总耗时 ～100 分钟（含 65 分钟孵育时间）

1.  在 Amicon® Pro 上样池中加入 200µL 亲和纯化树脂（根据融合标签选择，50% 悬浊液）

和 1.5 mL 漂洗缓冲液。1,000×g 离心 1 min。

2.  加入 0.5 mL 样品并与树脂吸打混匀。孵育 1 h，其间可温和搅动促进结合。

3. 1,000×g 离心 1 min 以去除未结合杂质。

4.  加入 1.5 mL 漂洗缓冲液，1,000×g 离心 1 min。

5.  上样池下端接上 Amicon® Ultra 0.5 mL 超滤管（有 5 种截留分子量规格可选）。

6.  加入 1 mL 洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育 5 min。

7. 4,000×g 离心 15 min。

8.  加上蛋白样品最终需要的缓冲液 1.5 mL。4,000×g 离心 15 min，置换缓冲液的同时进行浓缩。

9.  倒转 Amicon® Ultra 0.5 mL 超滤管，1,000×g 离心回收纯化和浓缩好的蛋白。

 

操作 2

脱盐/缓冲液置换并浓缩——20 倍体积温和换液，效率大大提升

5 次低速离心，总耗时 ～35 分钟

1.  在上样池中加入 0.5 mL TBS-T 预湿 Amicon® Pro。1,000×g 离心 1 min。

2.  优化选做：加入 1.5 mL 用于置换的缓冲液，1,000×g 离心 1 min。

3.  上样池下端接上 Amicon® Ultra 0.5 mL 超滤管（有 5 种截留分子量规格可选）。

4.  加入 1.5 mL 样品，4,000×g 离心 15 min 进行浓缩。

5.  加入 1.5 mL 需要置换的缓冲液，4,000×g 离心 15 min，换液的同时进行浓缩。

6.  倒转 Amicon® Ultra 0.5 mL 超滤管，1,000×g 离心回收处理好的蛋白。

 

操作 3 

抗体标记——操作步骤少、时间节省而抗体得率高

5 次低速离心，总耗时 ～50 分钟

1.  在上样池中加入 0.5 mL TBS-T 预湿 Amicon® Pro。1,000×g 离心 1 min。

2.  加入抗体样品

• 对于比较稀释的样品（< 1 mg/mL）

- 上样池下端接上 Amicon® Ultra 0.5 mL 超滤管（建议使用 50kDa）。

- 加上至多 1 mL 抗体样品， 4,000×g 离心 15 min。

• 对于浓度较高的的样品（1 mg/mL）

- 在 Amicon® Ultra 0.5 mL 超滤管（建议使用 50kDa）中加入至多 100µL 样品。

- 将装有样品的 Amicon® Ultra 0.5 mL 超滤管接在 Amicon® Pro 上样池的下端。

3. Amicon® Pro 上样池内加入预先准备好的 1.5 mL 含有染料的反应混合液。

4. 4,000×g 离心 15 min。

5.  优化选做：将样品在室温下多孵育 30 min。

6.  上样池中加入 1.5 mL PBS± NaN3。

7. 4,000×g 离心 15 min 换液同时浓缩。

8.  倒转 Amicon® Ultra 0.5 mL 超滤管 1,000×g 离心回收标记好的抗体。

 

更多关于 Amicon® Pro 的灵活应用正在各个实验室里被大家创造出来～～

欢迎告诉我们 Amicon® Pro 是如何帮助您提高蛋白操作效率的……

 

Amicon® Pro 24 个/盒（不含超滤管）目录号 ACS500024

 

可自行搭配 Amicon® Ultra-0.5 mL 超滤管

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· 10Kda 目录号 UFC501096 30Kda 目

·  录号 UFC503096 

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