师兄趁着开学前的狂欢时间，整理了几篇WB实验，IF实验，以及标签抗体和内参抗体选择的精品笔记，收获了一波彩虹夸奖！

 

热情师姐一听：

 论分享，咱从来不藏着掖着的！我给你来一篇IP实验中的小技巧！

 

免疫沉淀与免疫共沉淀

 

是基于抗体和蛋白的特异性相互作用，通过捕获与抗原特异性结合的抗体，进而从复杂的样品中捕获并富集目标蛋白，被广泛地应用于检测蛋白与蛋白的相互作用。

一般是利用Protein A-磁珠或Protein G-磁珠将该免疫复合物从混合物中沉淀下来，然后将可溶性靶蛋白从磁珠上洗脱下来，如果抗体没有共价连接到磁珠上或使用变性缓冲液进行洗脱，抗体也会被洗脱下来）。

而与靶蛋白相互作用的蛋白也会被一同捕获，随后利用WB等检测方法进行分析。

 

IP实验中的小技巧

 

IP和Co-IP实验都是基于抗体抗原的特异性反应，因此抗体对实验的影响很大，不同的抗体和抗原以及Protein G或Protein A的结合能力也不相同。除此之外，还有一些实验小技巧：

1.实验结果出现假阳性

● 考虑抗体特异性，使用特异性更高抗体

● 适当降低抗体浓度

2.实验结果检测到重链或轻链

● 使用对照抗体来排除影响，比如小鼠IgG单克隆抗体、兔lgG多克隆抗体

●选择不识别重链和轻链的二抗

3.未检测到与目的蛋白相互作用的蛋白或者信号太弱

● 蛋白与蛋白之间的相互作用太弱或不太稳定。应选择亲和力更高的抗体以捕获更多目的蛋白

● 抗体浓度太低。应调整使用抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度

● 裂解液的去垢剂浓度太高。应降低去垢剂浓度或更换去垢剂种类

4.无法获得标签融合表达蛋白

●标签抗体选择不当。通常做融合表达分析前，通过免疫沉淀技术获得标签融合蛋白也是非常重要的一步，因此选择一个合适的、可用于免疫沉淀的标签抗体是很必要的。

 

常用标签推荐：6X-His tag

 

6X His是一种组氨酸标签，位于蛋白质的氨基端或羧基端，由一系列组氨酸残基组成，是目前常用的标签之一。

推荐标签抗体货号SAB2702218

● 高特异性：小鼠单抗，品质保障

● 效价更高：ELISA稀释倍数可达1:1000~1:10000；IP稀释倍数1:500-1:3000

● 应用验证：经过ELISA, IF, IP, WB等多种应用验证

● 物种适用：人，小鼠

免疫沉淀。A：HeLa细胞裂解液，B：对照，2 µg小鼠IgG，C: 2 µg 6X-His标签抗体（货号：SAB2702218）免疫沉淀His融合蛋白。