大家有过这样的经历吗？师兄的实验效率高，数据好，但是轮到你的时候，各种奇怪结果却层出不穷！

为了让大家都能快乐科研，小编用身边人“惨痛”的教训整理了WB&IF实验中的一些常见问题和优化方案，希望给初学者们提供一些参考。

 

WB实验Tips

 

Western Blot (WB)实验是一种广泛使用的蛋白检测手段，整个过程包括了SDS-PAGE电泳、转膜、封闭、抗体孵育、显色几个过程，其中每个步骤都会影响WB的结果，为避免WB的结果 “翻车”，下文为大家总结WB结果经常会遇到的几类问题以及如何优化。

 

常见问题一：目的条带弱/无目的条带

WB结果中常出现无信号或者信号弱的现象，碰到这类情况，主要从样本、转膜过程、抗体三个方面进行讨论。

 

常见问题二：杂带多

有杂带，或条带出现位置偏离预期可能是另外一类普遍存在的问题从以下方面进行分析：

常见问题三：背景不干净

WB实验结果高背景也是高概率事件，我们主要从封闭洗脱，抗体，显色这几个方面来考虑

IF实验Tips

免疫荧光Immuno fluorescence technic（IF）一般指用荧光素标记抗体来进行抗原示踪，通过荧光显微镜观察荧光所在位置，从而对抗原进行定性和定位或者定量研究。

 

IF实验操作及Tips

免疫荧光实验的操作主要包括细胞片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育、荧光检测。

   

 

IF常见问题及解决方法总结

常见问题1 非特异性染色

常见问题2 信号弱

常见问题3 背景高